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蛋白组服务

简介 >>

iTRAQ/TMT相对定量蛋白质

同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)是由AB SCIEX公司研发的一种体外同种同位素标记的相对与绝对定量技术。iTRAQ由AB SCIEX公司研发,试剂盒中含8种同位素试剂,最多可同时标记8个多肽样品。TMT试剂盒含10种同位素的试剂由美国Thermo Scientific公司研发,最多可同时标记10个多肽样品。标记的多肽通过特异性标记多肽的氨基基团,使用串联质谱分析,可得到各肽段的一、二级质谱信息。通过生物信息学分析即同时可鉴定8种或10种不同样本中出所测蛋白及其在各样品中的表达差异。主要应用于疾病标记物筛选、药物作用靶点、微生物抗协迫机制、动植物发育分化机理等。

技术路线 >>


非标记定量(Label free)蛋白质组分析组分

在非标记定量模型中,主要以肽段的色谱峰积分面积为基础,通过比较一对生物样品中相对应到蛋白质酶解多肽的色谱积分面积而得到两者的相对丰度;或以肽段被质谱检测的计数为基础,通过归一化来表征被检测蛋白质的相对丰度。非标记技术认为肽段在质谱中被捕获检测的频率(Counts)与其在混合物中的丰度成正相关,因此蛋白质被质谱检测的计数反映了蛋白质的丰度,通过适当的数学公式可以将质谱检测计数与蛋白质的量联系起来,从而对蛋白质进行定量。

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样品要求 >>

实验方法 植物根、茎 植物叶、果 动物组织 血清 尿液 动物细胞 微生物
Lable free ≥200mg ≥200mg ≥200mg ≥500μl ≥10ml ≥106 ≥0.5g
iTRAQ/TMT ≥200mg ≥200mg ≥200mg ≥500μl ≥10ml ≥106 ≥0.5g
考染2DE ≥2g ≥2g ≥500mg ≥500μl ≥20ml ≥107 ≥1g(黄豆大小)
银染2DE ≥200mg ≥200mg ≥200mg ≥500μl ≥10ml ≥106 ≥0.5g
多肽 ≥2g ≥2g ≥2g ≥500μl ≥50ml ≥107 ≥2g(黄豆大小)
2D/SDS-PAGE质谱鉴定 肉眼可见条带
溶液蛋白LC-MSMS ≥20μg,浓度≥1μg/μl

样本收集应分装好,并尽快放置与液氮中冻存或-80℃冰箱长期保存,避免样本反复冻融,运输过程尽量使用干冰运输。

细胞和微生物样本计数不明确,可按离心后沉淀体积约为黄豆大小作为衡量标准。

样本为病原性微生物或具有侵染性的病变组织务必灭火后送样并注明。

2D/SDS-PAGE质谱鉴定样本不宜在液体中长期保存,银染样本保存于离心管中并做好标记、不宜封膜,常温运输。

户需要喜爱用特殊处理方法的,请备注说明并提供相关方法和文献。

验用的蛋白在公司提取的,则公司承担本实验的所有责任人,由客户提供的,如出现实验不理想情况,则公司不承担任何责任。

以上成列样本之外的其他样本或特殊样本的送样量请联系技术人员确定。

蛋白质谱检索如有特殊要求的,如检索条件或数据库等,客户需登记备注,并将目的序列或数据库告知。